Діагностика протозойних інфекцій

Не всі найпростіші (Protozoa), що паразитують у людини, є збудниками захворювань. Для виявлення виду збудника і підтвердження клінічного діагнозу не обійтися без методів лабораторної діагностики. Найпростіші, які оселилися в організмі людини, можуть перебувати в різних стадіях свого розвитку.

Класи паразитів і досліджувані біоматеріали

Поділяються найпростіші на 4 класи:

• корненожки (Rhizopoda) - представлені у людини амебами;
• жгутіконосци (flagellata) - основний патологічний представник - лейшмании;
• війчасті (ciliata) інфузорії - найпоширеніший збудник хвороби - балантидій;
• споровики (sporozoa) - небезпечний паразит цієї групи - малярійний плазмодій.

При инцистирование мікроорганізм набуває округлу форму і покривається захисною оболонкою. У формі цисти найпростіші стають малосприйнятливими до несприятливих факторів середовища.

Локалізація патогенних мікроорганізмів може бути в різних органах і тканинних структурах. Тому вибір матеріалу для дослідження залежить від того, де може перебувати паразит.

Дослідженню можуть потрапити під вплив:

• кров;
• кістковий мозок;
• вміст абсцесів (в печінці, легенях, мозку);
• вміст порожнин (черевної, плевральної, перикардіальної);
• мокрота;
• сеча;
• кал;
• слиз і ексудати кишечника, свищів.

Зверніть увагу: різновидів діагностики дуже багато, ми розглянемо ті види, які найбільш поширені в клінічній лабораторній практиці.

Приватні види діагностики

У кожному конкретному випадку перед лаборантом ставиться завдання знаходження певного збудника, інколи попутно з основним виявляються і інші.

Діагностика корненожек (амеб)

Налічується 6 видів цього мікроорганізму, здатного до проживання в кишечнику людини. Клінічне значення має тільки дизентерійна амеба, яка трапляється в вегетативної формі і у вигляді цист.

Основний шлях виявлення паразита - дослідження в нативному (необробленому) біологічному препараті.

Додатково застосовуються імунологічні методи:

• непрямої імунофлюоресценції;
• непрямої аглютинації (РНА);
• радіальної імунодифузії.

Діагностика війкових (інфузорій)

Патогенна форма мікроорганізмів цього роду - балантидій. Це мікроб, що викликає балантидиаз - хвороба, що супроводжується виразковим процесом товстого кишечника. Збудник виявляється в нативному мазку у вигляді вегетативної форми і цисти. Матеріал для мазка (кал і слиз) забирається при ректороманоскопічного дослідженні і висівається на спеціальні середовища.

Діагностика жгутіконосцев (лейшманий, лямблій, трипаносом, трихомонад)

Для людини становлять небезпеку лейшмании, трипаносоми, лямблії, трихомонади.

лейшмании - Мікроби, що викликають лейшманіоз, досліджуються в мазках крові, матеріалах кісткового мозку, зіскрібків з шкірних інфільтратів. У деяких випадках при діагностиці лейшманий застосовується посів на поживні середовища.

тріпаносоми - Збудники сонної хвороби (американський / африканський трипаносомоз, або хвороба Шагаса).

Африканський варіант визначають в початковому періоді при дослідженні периферичної крові. Патологічні мікроби при прогресуванні хвороби знаходяться в матеріалі пункцій лімфовузлів, в запущених стадіях - в спинномозковій рідині.

Збудника Американського трипаносомоза в гостру фазу хвороби можна знайти в жгутиковой формі. Надалі безжгутіковие паразити знаходяться в м`язових клітинах, міокарді, в нейронах центральної нервової системи.

Для діагностики трипаносом при підозрі на хворобу Шагаса досліджуваний матеріал обстежується під мікроскопом при малому збільшенні. При цьому мазки і товсту краплю попередньо фарбують.

лямблії, провідні паразитичний спосіб життя в дванадцятипалій кишці знаходять в жовчі або в аналізі калу (цисти).

трихомонади (Кишкова, ротова, вагінальна) Виявляються при мікроскопії матеріалів, взятих з уражених слизових оболонок.

Виявлення споровиков (малярійного плазмодія, збудника кокцидоз та ін.)

Споровики - паразитичні форми, що живуть в клітинах, тканинах і порожнинах організму.

Найбільш поширений і небезпечний для людини вид - малярійний плазмодій, який має 4 основні різновиди збудника: збудник триденної малярії, чотириденної малярії, тропічної малярії і малярії овалі.

Статевий розвиток плазмодія (спорогония) проходить в комарів Анофелес. Безстатеве (тканинна і еритроцитарна шизогонія) - в печінкової тканини і еритроцитах людини. Ці особливості життєвого циклу обов`язково враховуються при діагностиці малярійного плазмодія.

Так, у тільки що хворого хворого в крові можна виявити статеві клітини циклу спорогоніі. А ось на висоті малярійних нападів в крові у великій кількості з`являються шизонти. 

Більш того, в різні фази малярійній лихоманки виявляються різні форми плазмодія:

• в період ознобу кров наповнюється мерозоїтів, різновидом шизонтів;
• на висоті температури в еритроцитах скупчуються кільцеподібні трофозоїти;
• зниження температури характеризується переважанням амебовідних трофозоітов;
• в періоди нормального стану кров містить дорослі форми шизонтів.

Дослідження збудника малярії (плазмодія) проводиться в мазку і в товстій краплі.

Морфологічні форми паразитів для чіткої диференціації аналізуються шляхом специфічного фарбування. Цей варіант «візуалізації» дозволяє розібрати індивідуальні морфологічні особливості того чи іншого різновиду мікроорганізму.

Зверніть увагу: діагностика малярії при дослідженні мазків і товстих крапель крові іноді буває помилковою. Тромбоцити крові в деяких випадках можуть помилково бути зараховані до малярийному збудника. Також іноді симулюють плазмодій фрагменти лейкоцитів та інших клітин.

Основні методи дослідження найпростіших

Коротко ознайомимося з найпоширенішими методами дослідження на наявність найпростіших.

Діагностика найпростіших методом нативного мазка і мазка, пофарбованого розчином Люголя (в калі)

Препарат готується з емульсії калу в фізіологічному розчині. На предметне скло наносяться дві краплі натрію хлору і поруч розчин Люголя. В обидва склади дерев`яною паличкою додають досліджуваний матеріал і після накривання склом переглядають в різних дозволах мікроскопа.

За певними ознаками реєструють знайдених найпростіших. Для точності готують 2-3 препарату з одного матеріалу. У сумнівних випадках аналіз повторюють кілька разів протягом 2-3-х тижнів.

Методом можна виявити вегетативні і цистної форми:

• лямблій;
• балантидій;
• дизентерійної амеби.

Разом з патогенними формами визначаються інепатогенні найпростіші. Також у здорових носіїв знаходяться просвітні і цистної форми.

важливо: дослідження щоб уникнути неточностей і помилок слід проводити неодноразово.

Результат діагностики найпростіших методом нативного і пофарбованого мазка повинен містити опис форми збудника (просветная, циста, тканинна).

Вимоги до дослідження:

• забраний на аналіз матеріал (рідкий кал) досліджується не пізніше 30 хвилин після дефекації;
• оформлений кал необхідно піддати діагностиці протягом 2 годин після дефекації;
• в матеріалі не повинно бути домішок (дезінфікуючих засобів, води, сечі);
• для роботи з матеріалом використовують тільки дерев`яні палички, скляні не придатні через зісковзування слизу;
• палички після використання негайно необхідно спалювати.

Метод консервації (дослідження калу) при діагностиці найпростіших

Дослідження проводиться шляхом фіксації найпростіших з консервантом. Відмінність цього методу від попереднього в тому, що консерванти дозволяють зберегти препарат протягом тривалого періоду.

Використовувані консерванти:

• Барроу. Містить консервуючі речовини: 0,7 мл хлориду натрію, 5 мл формаліну, 12,5 мл 96% спирту, 2 г фенолу і 100 мл дистильованої води. Фарбувальний склад: 0,01% розчин тіоніном (Азура).
• Розчин Сафарліева. Склад: 1,65 г сульфату цинку, 10 мл формаліну, 2,5 г кристалічного фенолу, 5 мл оцтової кислоти, 0,2 г метиленового синього, 100 мл води. Цей консервант використовується у випадках, коли матеріал повинен зберігатися більше місяця.

Консервантом наповнюються порожні флакони, в них переносять матеріал, в пропорціях 3: 1, потім при необхідності додають барвник. Оцінка результатів проводиться при дослідженні 2-3-х препаратів.

Метод формалін-ефірного збагачення (аналіз на наявність найпростіших в калі)

Цей спосіб діагностики дозволяє відокремити і сконцентрувати цисти найпростіших. Для аналізу потрібні наступні інгредієнти: формалін (10 мл), 0,85 г ізотонічного розчину, дистильована вода, сірчаний ефір, розчин Люголя.

Суміш біоматеріалу з перерахованими рідинами змішують і центрифугують. Отриманий на дні пробірки осад забарвлюють розчином Люголя і досліджують на предмет наявності цист і вегетативних форм.

Метод знаходження лейшманій (мазок кісткового мозку)

Для діагностики лейшманіозу використовуються реактиви: суміш Никифорова (сірчаний ефір і етиловий спирт), фосфатний буфер, Азур-еозин за Романовським.

Речовина кісткового мозку дуже обережно поміщають на предметне скло після спеціальної підготовки. Використовується мікроскоп з иммерсионной системою.

У гострий період хвороби в пунктаті виявляється велика кількість лейшманий.

Зверніть увагу: іноді кров`яні клітини можуть нагадувати оброблені лейшмании, тому дуже важливо лаборанту бути уважним і мати достатній досвід для самостійного дослідження.

Метод виявлення лейшманій в мазку з шкірного інфільтрату

Необхідні реактиви аналогічні попередньому аналізу.

Досліджуваний матеріал отримують з наявного горбка або виразкового вмісту. Зішкріб при підозрі на лейшманіоз робиться дуже акуратно скальпелем, без крові. Потім готується препарат на склі. Для точності одержуваних результатів одночасно піддають огляду кілька препаратів.

При наявності захворювання серед присутніх в досліджуваному матеріалі макрофагів, фібробластів, лімфоїдних клітин визначаються і лейшмании.

Метод виділення чистої культури лейшманій, отриманих шляхом зіскрібка патологічних тканин

При цьому способі діагностики найпростіших зішкріб тканин поміщають у спеціальні, в якій відбувається активне розмноження лейшманий.

Перед забором зіскрібка шкіру ретельно обробляють спиртом, потім робиться надріз горбка, з дна якого витягується вміст і поміщається в пробірку з середовищем. Матеріал забирається кілька разів, після чого він поміщається в різні пробірки. Потім в термостаті при температурі 22-24 градуси відбувається культивування. Результати оцінюють під мікроскопом. Цей метод застосовується, коли інші, більш дешеві і швидкі способи діагностики найпростіших неефективні.

Побачити, як на практиці розшифровуються аналізи на наявність найпростіших за краплею крові, ви зможете, подивившись відео-огляд: