Полімеразна ланцюгова реакція в діагностиці інфекційних захворювань

Відео: Майстер-клас "Методи молекулярної біології. Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР)"

ПЛР - один з методів ДНК-діагностики, що дозволяє збільшити кількість копій детектируемого ділянки геному (ДНК) бактерій або вірусів в мільйони разів з використанням ферменту ДНК-полімерази. Тестований специфічний для даного геному відрізок нуклеїнової кислоти багаторазово множиться (амплифицируют), що дозволяє його ідентифікувати. Спочатку молекула ДНК бактерій або вірусів нагріванням розділяється на два ланцюги, потім в присутності синтезованих ДНК-праймерів (послідовність нуклеотидів специфічна для визначається генома) відбувається зв`язування їх з комплементарними ділянками ДНК, синтезується другий ланцюг нуклеїнової кислоти слідом за кожним праймером в присутності термостабільної ДНК-полімерази . Виходить дві молекули ДНК. Процес багаторазово повторюється. Для діагностики досить однієї молекули ДНК, тобто однієї бактерії або вірусної частинки. Введення в реакцію додаткового етапу - синтезу ДНК на молекулі РНК за допомогою ферменту зворотної транскриптази - дозволило тестувати РНК-віруси, наприклад вірус ВГС. ПЛР - триступеневий процес, що повторюється циклічно: денатурація, отжиг праймерів, синтез ДНК (полімеризація). Синтезоване кількість ДНК ідентифікують методом ІФА або електрофорезу.

Відео: Майстер-клас "Полімеразна ланцюгова реакція"

В ПЛР можна використовувати різний біологічний матеріал - сироватку або плазму крові, зішкріб з уретри, біоптат, плевральну рідину, ліквор і т.д. В першу чергу ПЛР застосовують для діагностики інфекційних хвороб, таких як ВГВ, ВГС, ВГБ, ЦМВ-інфекція, інфекційні захворювання, що передаються статевим шляхом (гонорея, мотлох-гур, мико плазмова, уреаплазменная інфекції), туберкульоз, ВІЛ-інфекція і т. д.

Перевага ПЛР в діагностиці інфекційних захворювань перед іншими методами досліджень полягає в наступному:

Відео: ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція)

збудник інфекції можна виявити в будь-який біологічної середовищі організму, в тому числі і матеріалі, одержуваному при біопсії;

можлива діагностика інфекційних хвороб на ранніх стадіях захворювання;

Відео: Нові методи діагностики інфекційних захворювань освоюють в регіонах

можлива кількісна оцінка результатів досліджень (скільки вірусів чи бактерій міститься в досліджуваному матеріалі);

висока чутливість метода- наприклад, чутливість ПЛР для виявлення ДНК вірусу ВГВ в крові становить 0,001 пг / мл (приблизно 4х10² копій / мл), в той час як чутливість методу гібридизації ДНК з використанням розгалужених зондів - 2,1 пг / мл (приблизно 7х10⁵ копій / мл).