Дослідження ферментів і ізоферментів

Ферменти - специфічні білки, які виконують в організмі роль біологічних каталізаторів. Ферменти містяться у всіх клітинах організму, де їх концентрація значно вище, ніж в плазмі крові. Найбільш часто в якості об`єкта для дослідження використовують сироватку

крові, ферментний склад якої відносно постійний. Нормальна активність ферментів в сироватці крові відображає співвідношення між біосинтезу і вивільненням ферментів (при звичайному оновленні клітин), а також їх кліренсом з кровотоку. Підвищення швидкості оновлення ферментів, пошкодження клітин зазвичай призводять до підвищення активності ферментів в сироватці крові. У сироватці крові виділяють три групи ферментів: клітинні, секреторні і екскреторні.

Клітинні ферменти в залежності від локалізації в тканинах ділять на дві групи:

Відео: Лекція 4 Ферменти Кінетика, інгібування, ізоферменти

неспецифічні ферменти, які каталізують загальні для всіх тканин реакції обміну і знаходяться в більшості органів і тканин;

органоспецифические або індикаторні ферменти, специфічні тільки для певного типу тканин.

Відео: Ферменти в клінічної біохімії

У сироватці крові активність клітинних ферментів низька або взагалі відсутня. При патологічних процесах активність ферментів цієї групи в сироватці крові залежить від швидкості вивільнення з клітин, яка в свою чергу визначається швидкістю і ступенем їх пошкодження.

Секреторні ферменти (церулоплазмін, псевдохолінестеразой, ліпопро-теіновая ліпаза) надходять безпосередньо в плазму крові і виконують в ній специфічні функції. Ці ферменти синтезуються в печінці і постійно вивільняються в плазму. Їх активність в сироватці крові вище, ніж в клітинах або тканинах. У клінічній практиці вони представляють інтерес, коли їх активність в сироватці крові стає нижче норми за рахунок порушення функції печінки.

Екскреторні ферменти утворюються органами травної системи (підшлунковою залозою, слизовою оболонкою кишечника, печінкою, ендотелієм жовчних шляхів). До них відносяться а-амілаза, ліпаза, лужна фосфатаза та ін. В нормі їх активність в сироватці крові низька і постійна. Однак при патології, коли блокований будь зі звичайних шляхів екскреції, активність цих ферментів в сироватці крові значно збільшується.

Вимірюється активність ферментів може бути обумовлена наявністю досить близьких за властивостями, але кілька відмінних один від одного молекулярних форм ферментів. Ці різні форми отримали назву ізоферментів. Дослідження ізоферментів в клінічній практиці представляє інтерес, коли окремі ізоферменти утворюються в різних тканинах (наприклад, в серце і печінки переважають різні ізоферменти ЛДГ).

Відео: Механізм дії препарату Meso-Xanthin F199 ™

Для кількісної оцінки активності ферментів Комісія по ферментам Міжнародного біохімічного союзу рекомендувала стандартну міжнародну одиницю (МО). За одиницю активності будь-якого ферменту приймають то його кількість, яка в оптимальних умовах каталізує перетворення 1 мкмоль субстрату в 1 хвилину (мкмоль / хв).

Про активність ферменту судять за швидкістю каталізуються реакції при певних температурі і рН середовища, концентрації субстрату. Тому при визначенні активності ферментів необхідно строго дотримуватися одні й ті ж умови.

Ферментативна реакція чутлива до змін температур. Зазвичай її прийнято проводити при температурі, що лежить в межах

25-40 ° C, однак при різній температурі оптимальні значення рН, концентрації буфера, субстрату і інших параметрів різні. Максимальну активність більшості ферментів в організмі людини спостерігають при температурі приблизно 37 ° C. Тому з метою міжнародної стандартизації вимірювання активності ферментів проводять при даній температурі. Нижче нормальні величини активності ферментів наведені для температури 37 ° C.

Відео: Popular Videos - Enzyme inhibitor & Lecture

Дослідження ферментів застосовують у клінічній практиці для вирішення різних завдань: встановлення діагнозу, проведення диференціальної діагностики, оцінки динаміки перебігу хвороби, визначення ефективності терапії, ступеня одужання і прогнозу захворювання. Відомо три типи змін ферментів при патології: гіперферменте-мія - підвищення активності ферментів в порівнянні з нормою, гіпо- ферментеміі - її зниження, дісферментемія - поява в крові ферментів, в нормі не виявляються.