Иммунофенотипирование гемобластозов

Значний прогрес в гематологічних дослідженнях пов`язаний в останні роки з використанням сучасних імунологічних методів і автоматизованих засобів аналізу і сортування клітин периферичної крові і кісткового мозку - проточних цитометров. Традиційні морфологічні та цитохімічні дослідження клітин субстрату хвороби (кров, червоний кістковий мозок, лімфатичні вузли, селезінка тощо) у багатьох випадках, особливо при лімфопроліферативних захворюваннях, не дозволяють виявити все різноманіття варіантів серед морфологічно подібних форм і встановити джерело походження патологічного клону . Ці завдання можуть бути вирішені тільки шляхом вивчення імунологічної характеристики клітин. Кожній стадії диференціювання гемо- поетичних клітин відповідає свій набір Аг, які за міжнародною класифікацією називаються дифференцировочного і поділяються на кластери диференціювання, що позначаються CD. При неопластических зміни блок диференціювання може статися на будь-якій стадії нормального розвитку клітин, в результаті чого утворюється клон патологічних клітин, що визначають субстрат хвороби і мають однакову імунологічну (або фенотипічну) характеристику. Провівши дослідження цих маркерів на клітинах, можна визначити, якій формі і варіанту захворювання вони відповідають, тобто на основі імунологічного фенотипу клітин проводити диференційну діагностику, яка найбільш важка при лімфопроліферативних захворюваннях, тому що основний клітиною патологічного субстрату хвороби є морфологічно майже однотипні клітини. Фенотипування дозволяє за допомогою моноклональних АТ типировать бластні і зрілі клітини крові миело-, моно-, лімфоцитарного ряду за наявністю дифференциро-вальних Аг (рецепторів) в клітинній стінці. На мембранах клітин крові і червоного кісткового мозку можна виявити такі Аг (маркери).

CD2 - одновимірний трансмембранний гликопротеид. Він присутній на поверхні всіх циркулюючих в крові Т-лімфоцитів і на деяких NK-лімфоцитах. CD2 бере участь в процесі альтернативної активації Т-лімфоцитів. Виявлення CD2 за допомогою моноклональних АТ в клінічній практиці використовують для Феноти-бенкетування гострих Т-клітинних лейкозів, лімфом, хронічних запальних і імунодефіцитних станів.

CD3 - білковий комплекс, асоційований з Аг-специфічним Т-клітинним рецептором, це основний функціональний маркер Т-лімфоцитів. Він сприяє передачі сигналу активації з мембра

ни в цитоплазму клітини. Визначення CD3 показано для діагностики гострих Т-клітинних лейкозів, лімфом (CD3 НЕ експресується прі не-Т-клітинних лімфоїдних новоутвореннях) і імунодефіцит-них захворювань.

CD4 - трансмембранний гликопротеид, експрессіруемий субпопуляцією Т-хелперів (індукторів), складових 45% лімфоцитів периферичної крові. На ранніх стадіях розвитку лімфоцитів в тимусі, Аг CD4, так само як CD8, експресується всіма кортикальними лімфоцитами. Мозкові тімоціти, фенотип яких схожий зі зрілими CD4 + Т-клітинами периферичної крові (Т-хелпери), експрес-ють вже або CD4, або CD8 рецептори. У периферичної крові до 5% клітин несуть одночасно маркери CD4 і CD8. Незначна експресія CD4 можлива на деяких клітинах моноцитарного ряду. CD4 експресується в більшості випадків Т-клітинних лімфом, включаючи грибоподібний мікоз, а також при HTLV-асоційоване Т-клітинному лейкозі (HTLV - human T-lymphotropic virus - Т-лім-фотропний вірус людини).

CD5 - одноланцюговий гликопротеид, присутній на всіх зрілих Т-лімфоцитах і більшості тимоцитов, слабо експресується В-лімфоцитами. CD5 виявляють на неопластических клітинах В-кле-точного хронічного лімфоцитарного лейкозу і центроцітарной лімфоми. При інших типах злоякісних лімфоїдних захворювань - фолікулярної лімфоми, волосатоклеточном лейкозі, крупноклеточной лімфомі - CD5 НЕ експресується.

CD7 - одноланцюговий білок, найраніший маркер Т-клітинного диференціювання. Він експресується про-Т-лімфоцитами ще до міграції їх в тимус. CD7 виявляють на більшості NK-клітин, слабка експресія відзначена на моноцитах. В-лімфоцити і гранулоцити не містять цього Аг. Визначення CD7 застосовують з метою діагностики лімфом, дитячих Т-клітинних лімфобластних лейкозів.

CD8 - білок, що складається з двох поліпептидних ланцюгів, пов`язаних дисульфідними містками. Він експресується субпопуляцією ци-тотоксіческіх і супресорних Т-лімфоцитів, які становлять 20-35% лімфоцитів периферичної крові. Цей Аг мають також NK-лімфоцити, кортикальні тімоціти, 30% мозкових тімоці-тов і субпопуляції клітин червоного кісткового мозку. CD8 досліджують для кількісної оцінки змісту Т-супресорів

CD 10 - асоційована з клітинною мембраною ендопептідаза. CD10 експресують молоді форми В-лімфоцитів і субпопуляція кортикальних лімфоцитів. CD10 експресують все клітини ОЛ.

CD11с експресують на клітинній мембрані макрофаги, моноцити, гранулоцити, NK-клітини і клітини волосатоклітинному лейкозу.

CD13 - гликопротеид, експрессіруемий клітинами міеломоноцітар-ного ряду (клітини-попередники, нейтрофіли, базофіли, еозином-філи, моноцити і клітини мієлоїдних лейкозів). Він відсутній на Ті По-лімфоцитах, еритроцитах і тромбоцитах.

CD14 - поверхневий мембранний гликопротеид. Його експресують в основному моноцити і макрофаги. CD14 визначають більш ніж на

95% моноцитах периферичної крові і кісткового мозку. Сильну експресію CD14 спостерігають при гострих мієлобластних лейкозах. При гострих і хронічних лімфобластних лейкозах цей артеріальної гіпертензії не Експрес-ється.

CD15 являє собою олігосахарид. Він бере участь в процесах фагоцитозу і хемотаксису. Цей Аг присутній на поверхні зрілих гранулоцитів і клітинах Березовського-Штернберга. Експресію Аг CD15 виявляють при хворобі Ходжкіна. При неходжкінських лим-фомах CD15 в більшості випадків не виявляють.

CD16 експресується на поверхні гранулоцитів, моноцитів, макрофагів і NK-клітин. Всі лімфоцити, які експресують цей Аг, мають здатність до антителозависимой клітинної цітотоксічнос-ти. CD16 визначають при типування хронічних мієлоцитарна лейкозів, для характеристики NK-клітин.

CD 19 - глікопротеїн, присутній на всіх периферичних В-лімфоцитах, а також на всіх попередників В-клітин. Він відсутній на плазматичних клітинах. Це найбільш ранній маркер В-клітин, грає важливу роль в регуляції активації і проліферації В-лімфоцитів. CD19 експресується на всіх неопластичних клітинах гострих лейкозів В-клітинного походження, а також присутній при деяких формах гострих монобластний лейкозів.

CD20 - неглікозильовані білок. В онтогенезі В-лімфоцитів Аг CD20 з`являється після CD19 на стадії пре-В-клітинної діфферен-цировки лімфоцитів. На плазматичній мембрані плазматичних клітин він відсутній. Експресується при ГЛЛ, В-клітинних хронічних лимфоцитарних лейкозі, волосатоклітинному лейкозі, лим-фомах Беркітта і дуже рідко - при гострих монобластний лейкозах.

CD21 - гликопротеид, в значній кількості присутній на В-лімфоцитах в лімфоїдних органах і в невеликій кількості - на В-клітинах периферичної крові. CD21 - рецептор для вірусу Еп-Стайна-Барр.

CD22 - білок, що складається з двох поліпептидних ланцюгів. Експрес-сіруется на мембрані більшості В-лімфоцитів, включаючи клітини-попередники (пролімфоціти). Артеріальної гіпертензії не експресується на В-лімфоцитах (плазматичніклітини) після їх активації. Найбільш виражену експресію CD22 виявляють на клітинах при волосатокле-точному лейкозі, слабку - при мієлоїдних лейкозах і не-Т-клітинних-них ГЛЛ.

CD23 - гликопротеид, експрессіруемий активованими В-лім-фоцитов периферичної крові в набагато більшому ступені. CD23 опосередковує IgE-залежну цитотоксичність і фагоцитоз макрофагами і еозинофілами.

CD25 - одноланцюговий гликопротеид, ідентифікований як нізкоаффінние рецептор до ІЛ-2. Цей рецептор експресується на активованих Т-лімфоцитах і, з меншою щільністю, на активованих В-клітинах. У периферичної крові здорових людей Аг присутні більше ніж на 5% лімфоїдних клітин.

CD29 - рецептор фібронектину. Широко поширений в тканинах, експресується лейкоцитами. Визначення CD29 на клітинах пери

ферической крові використовують для типування субпопуляції Т-кле-ток, що мають фенотип CD4 + CD29 +, які називають хелперами 2 типу (Th2). Ці клітини за допомогою продукції лімфокінів беруть участь в реалізації гуморального імунної відповіді.

CD33 - трансмембранний гликопротеид. Присутній на поверхні клітин мієлоїдного і моноцитарного рядів. Його виявляють на поверхні моноцитів і, в меншій мірі, гранулоцитів периферичної крові. Приблизно 30% клітин червоного кісткового мозку експресують CD33, включаючи мієлобласти, проміелоціти і міелоціти. Аг відсутня на мембранах поліпотентних стовбурових клітин. Визначення CD33 використовують для характеристики клітин при лейкозі миелоидного походження. Клітини лейкозів лімфоїдного і еритроїдного походження не експресують CD33.

CD34 - фосфоглікопротеін, експресується гемопоетичними клітинами-попередниками, включаючи монопотентние стовбурові клітини. Найбільш виражену експресію Аг спостерігають у ранніх попередників- при дозріванні клітин експресія маркера падає. CD34 виявлений також на ендотеліальних клітинах. Визначення CD34 використовують для характеристики клітин при гострих миело- і лімфо-бластних лейкозах. При хронічних лимфоцитарних лейкозах і лим-фомах експресії Аг CD34 не виявляється.

CD41a експресується тромбоцитами і мегакариоцитами. Монокль-нальні АТ для виявлення CD41a використовують для діагностики ме-гакаріобластного лейкозу. При тромбастенії Глянцманна експресія цього Аг відсутня або значно пригнічена.

CD42b - мембранний гликопротеид, що складається з двох поліпептидних ланцюгів. Маркер виявляють на поверхні тромбоцитів і МЕГАКАР-цитов. У клінічній практиці виявлення CD42b використовують для діагностики тромбоцитопатії - синдрому Бернара-Сульє.

CD45RA належить до класу трансмембранних глікопротеїнів. Це загальний лейкоцитарний Аг. Експресується на клітинній мембрані В-лімфоцитів, в меншій мірі Т-лімфоцитів і на зрілих мозкових тимоцитах. Маркер НЕ експресується гранулоцитами.

CD45RО - низькомолекулярна изоформа CD45RA - загального лейкоцитарного Аг. Виявляють на Т-клітинах (Т-лімфоцити пам`яті), субпопуляції В-лімфоцитів, моноцитах і макрофагах. Моноклональні АТ до CD45RО взаємодіють з більшістю тимоцитов, субпопуляцією покояться CD4 + і CD8 + Т-лімфоцитів і зрілими активованими Т-клітинами. Клітини мієломоноцитарний походження, гранулоцити і моноцити також несуть цей Аг. Його виявляють при цен-тробластних і імунобластні лімфомах.

CD46 - О-глікозильований димер. Він широко поширений в тканинах і експресується Т-і В-лімфоцитами, моноцитами, гра-нулоцітамі NK-клітинами, тромбоцитами, ендотеліальними клітинами, фібробластами, але відсутній на поверхні еритроцитів. CD46 забезпечує захист тканин від дії комплементу.

CD61 - тромбоцитарний Аг. Експресується на тромбоцитах периферійної крові і червоного кісткового мозку, а також на мегакаріоцит-тах і мегакаріобласти. Його визначення використовують в якості маркё

ра при гострих мегакаріобластний лейкозах. Експресія Аг відсутня або пригнічена у хворих з тромбастенію Глянцманна.

CD95, званий також Fas або APO-1, - трансмембранний гли-копротеін, член сімейства рецепторів фактора некрозу пухлин. Він експресується в значних кількостях на Т-лімфоцитах (CD4 + і CD8 +) периферичної крові і, в меншій мірі, на В-лім-фоцитов і NК-клітинах. Цей Аг експресується також на гранулоціт-тах, моноцитах, клітинах тканин і неопластичних клітинах. Зв`язування CD95 з Fas-лігандом (CD95L), індукує в клітинах апоптоз.

CD95L, або Fas-ліганд, мембранний білок, що відноситься до сімейства рецепторів фактора некрозу пухлин. Цей Аг експресується цито-токсичними Т-лімфоцитами, NК-клітинами і дуже часто пухлинними клітинами- основний індуктор апоптозу в клітинах.

HLA-DR - мономорфная детермінанта молекул II класу головного комплексу гістосумісності людини (HLA). Маркер Експресується-ється на клітинах Лангерганса, дендритних клітинах лімфоїдних органів, певних типах макрофагів, В-лімфоцитах, активованих Т-клітинах і епітеліальних клітинах тимуса. Дослідження на даний маркер використовують для кількісного визначення активованих Т-лімфоцитів з фенотипом CD3 + HLA-DR +.

Використовуючи різний підбір моноклональних антитіл до маркерів, можна скласти фенотипический портрет клітин, характерних для даної форми лейкозу (табл.-7-30).

Крім використання методів іммунофенотіпірованія для діагностики та диференціальної діагностики гемобластозів, особливо важливим виявилося їх застосування в процесі лікування для оцінки стану ремісії і залишкової популяції лейкозних клітин. Знаючи фенотипический «портрет» бластних клітин в період встановлення діагнозу, за цими маркерами вдається виявити клітини лейкозного клону в період ремісії, а по наростанню їх кількості - передбачити розвиток рецидиву задовго (за 1-4 міс) до появи його клініко-морфологічних ознак.

Таблиця імунофенотипових характеристика лейкозів [Myers A.R., 1996]