Аналіз поліморфізму довжини рестрикційних фрагментів

Широке використання різних рестрикційних ендонуклеаз для аналізу хромосомної ДНК виявило величезну варіабельність генома людини. Навіть невеликі зміни в кодують і регуляторних областях структурних генів можуть призвести до припинення синтезу певного білка або до втрати його функції в організмі людини, що, як правило, позначається на фенотипі пацієнта. Однак приблизно 90% генома людини складається з некодуючих послідовностей, які більш мінливі і містять безліч так званих нейтральних мутацій, або поліморфізмів, і не мають фенотипова вирази. Такі поліморфні ділянки (локуси) використовуються в діагностиці спадкових захворювань як генетичних маркерів. Поліморфні локуси присутні у всіх хромосомах і зчеплені з певним ділянкою

гена. Визначивши локалізацію поліморфного локусу, можна встановити, з яким геном пов`язана мутація, яка викликала захворювання у пацієнта.

Для виділення поліморфних ділянок ДНК застосовуються бактеріальні ферменти - рестріктази, продуктом яких є сайти рестрикції. Спонтанні мутації, що виникають в поліморфних сайтах, роблять їх резистентними або, навпаки, чутливими до дії специфічною рестріктази.

Мутационная мінливість в сайтах рестрикції може бути виявлена по зміні довжини рестрікцірованних фрагментів ДНК, шляхом поділу їх з використанням електрофорезу і подальшої гібридизації зі специфічними ДНК-зондами. При відсутності рестрикції в полиморфном сайті на електрофореграмах буде виявлятися один великий фрагмент, а при її наявності буде присутній менший за розміром фрагмент. Наявність або відсутність сайту рестрикції в тотожних ло-кусах гомологічниххромосом дозволяє досить надійно маркувати мутантний і нормальний ген і простежити його передачу потомству. Таким чином, при дослідженні ДНК пацієнтів, в обох хромосомах яких присутня сайт рестрикції в поліморфної області, на електрофор-грамі будуть виявлятися короткі фрагменти ДНК. У пацієнтів, гомозиготних по мутації, що змінює поліморфний сайт рестрикції, будуть виявлятися фрагменти більшої довжини, а у гетерозиготних - короткі і довгі фрагменти.